校準(zhǔn)曲線包括標(biāo)準(zhǔn)曲線和工作曲線,前者用標(biāo)準(zhǔn)溶液系列直接測量,沒有經(jīng)過水樣的預(yù)處理過程,這對于廢水樣品或叢體復(fù)雜的水樣往往造成較大誤差;而后者所使用的標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)過了與水樣相同的消解、凈化、測員等全過程。
凡應(yīng)用校準(zhǔn)曲線的分析方法,都是在樣品測得信號值后,從校準(zhǔn)曲線上查得其含量(或濃度)。因此,繪制準(zhǔn)確的校準(zhǔn)曲線,直接影響到樣品分析結(jié)果的準(zhǔn)確與否。此外,校準(zhǔn)曲線也確定了方法的測定范圍。
1、校準(zhǔn)曲線的繪制
?、賹?biāo)準(zhǔn)系列,溶液以純?nèi)軇閰⒈冗M(jìn)行測量后,應(yīng)先作空白校正,然后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;
②標(biāo)準(zhǔn)溶液一般可直接測定,但如試樣的預(yù)處理較復(fù)雜致使污染或損失不可忽略時(shí),應(yīng)和試樣同樣處理后再測定,在廢水測定或有機(jī)污染物測定中十分重要,此時(shí)應(yīng)做工作曲線。
?、坌?zhǔn)曲線的斜率常隨環(huán)境溫度、試劑批號和貯存時(shí)間等實(shí)驗(yàn)條件的改變而變動(dòng)。因此,在測定試樣的同時(shí),繪制校準(zhǔn)曲線zui為理想,否則應(yīng)在測定試樣的同時(shí),平行測定零濃度和中等濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液各兩份,取均值相減后與原校準(zhǔn)曲線上的相應(yīng)點(diǎn)核對,其相對差值根據(jù)方法精密度不得大于5%-10%,否則應(yīng)重新繪制校準(zhǔn)曲線。
2、校準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn)
①線性檢驗(yàn):即檢驗(yàn)校準(zhǔn)曲線的稍密度。對于以4-6個(gè)濃度單位所獲得的測量信號值繪制的校準(zhǔn)曲線,分光光度法一般要求其相關(guān)系數(shù)|γ|≥0.9990,否則應(yīng)找出原因并加以糾正,重新繪制合格的校準(zhǔn)曲線。
②截距檢驗(yàn):即檢驗(yàn)校準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確度,在線性檢驗(yàn)合格的基礎(chǔ)上,對其進(jìn)行線性回歸,得出回歸方程y=a+bx,然后將所得截距a與0作t檢驗(yàn),當(dāng)取95%置信水平,經(jīng)檢驗(yàn)無顯著性差異時(shí),a可作0處理,方程簡化為y=bx,移項(xiàng)得x=y/b。在線性范圍內(nèi),可代替查閱校準(zhǔn)曲線,直接將樣品測量信號值經(jīng)空白校正后,計(jì)算出試樣濃度。
當(dāng)a與0有顯著性差異時(shí),表示校準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算結(jié)果準(zhǔn)確度不高,應(yīng)找出原因并予以校正后,重新繪制校準(zhǔn)曲線并經(jīng)線性檢驗(yàn)合格,再計(jì)算回歸方程,經(jīng)截距檢驗(yàn)合格后投入使用。
回歸方程如不經(jīng)上述檢驗(yàn)和處理,就直接投入使用,必將給測定結(jié)果引入差值相當(dāng)于截距a的系統(tǒng)誤差。
?、坌甭蕶z驗(yàn):即檢驗(yàn)分析方法的靈敏度,方法靈敏度是隨實(shí)驗(yàn)條件的變化而改變的。在*相同的分析條件下,僅由于操作中的隨機(jī)誤差所導(dǎo)致的斜率變化不應(yīng)超出一定的允許范圍,此范圍因分析方法的精度不同而異。例如,一般而言,分子吸收分光光度法要求其相對差值小于5%,而原子吸收分光光度法則要求其相對差值小于10%等等。文章由華晨儀器整理。
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